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细胞核蛋白提取试剂盒
产品编号: BB-3115
产品系列: 蛋白提取试剂盒
- 产品描述
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注：● 蛋白提取液： 含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。● 蛋白酶抑制剂混合物：包含7种独立的蛋白酶抑制剂，AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64、EDTA。注意：1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。2、如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。储存条件：蛋白提取液，磷酸酶抑制剂2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。有效期：一年。注意事项：● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。产品简介：我公司核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞中提取核蛋白。提取过程简单方便，可在1 小时内完成。制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。产品特点：1、使用方便，从细胞中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。2、将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。试剂盒以外自备试剂和仪器● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管● 涡旋振荡器 ● 冰箱，冰盒使用方法：使用注意事项：1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。5.Western 实验内参可以选用Lamin A、Lamin B、TBP、Histon H3。1. 提取液制备：每 200ul 冷的细胞核蛋白提取液A 和B 中分别加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。2. 取 5-10×106 个细胞①，在4℃，500×g 条件下离心2-3 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。4. 每 20ul 细胞压积中加入200μl 冷的提取液 A，高速涡旋振荡15 秒，置冰上10分钟。5. 再次高速涡旋振荡 5 秒，然后在4℃，16000×g 条件下离心5 分钟。6. 弃上清。7. 在沉淀中加入 200μl 冷的提取液B，高速涡旋振荡15 秒。8. 置冰上 40 分钟，每隔10 分钟高速涡旋振荡15 秒。9. 在 4℃，16000×g 条件下离心10 分钟。10. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。11. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。注：① 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。② 建议用BCA 法进行蛋白定量。③ 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。使用本产品发表的部分新文献：● Jinchun Qian et al. Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary humanumbilical vein endothelial cellsJournal of Ethnopharmacology 2010 Volume 128, Issue 2, Pages 438-445 （IF=2.466）
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