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昆虫膜蛋白提取试剂盒
产品编号: BB-3153
产品系列: 蛋白提取试剂盒
- 产品描述
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注：● 蛋白提取液： 含多种有效成分，可以充分释放昆虫细胞跨膜蛋白。● 蛋白酶抑制剂混合物：包含7种独立的蛋白酶抑制剂，AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64、EDTA。注意：1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。2、如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存；磷酸酶抑制剂2-8℃保存。有效期：一年。注意事项：● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。产品简介：哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。跨膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此跨膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备跨膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使跨膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了跨膜蛋白的功能研究。我公司昆虫细胞跨膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产跨膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂，适用于从昆虫组织或培养细胞中温和、高效地抽提膜/跨膜蛋白和膜蛋白复合物。用本试剂盒抽提和富集到的蛋白包括从分子量很小到很大的蛋白，单次跨膜至7 次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白复合物。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。产品特点：1、使用方便，从昆虫细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。2、将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。试剂盒以外自备试剂和仪器● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管● 涡旋振荡器 ● 冰箱，冰盒使用方法：使用注意事项：1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。提取步骤：1、每500ul 抽提液A 中加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物和2ul 磷酸酶抑制剂，充分混匀后置冰上备用。2、取适量昆虫组织样本剪碎①，置于研钵中用液氮研磨。（没有液氮也可直接置冰上研磨即可②）3、研磨后加入500ul 提取液，混匀后于一个预冷的干净离心管中在冰上静置2-3 小时。4、将提取液在低温下12000×g 离心5 分钟，取上清。5、在上清中加入10ul 抽提液B，充分混匀。6、在37℃水浴10 分钟。7、在37℃ 1000×g 离心5 分钟③。8、小心吸取管底部大约50ul 液体。9、用80-200μl冰冷试剂C稀释该溶液，即得跨膜蛋白样品。将上述蛋白提取物定量④后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验⑤。注：① 样本数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。由于膜蛋白含量较少，需要较多的组织或细胞才能保证得率。② 用液氮研磨的方法更佳.③ 必需保证在 37℃左右下离心，至少确保30℃以上。无可控温的离心机时，用常温的离心机在室温离心即可，适当缩短离心时间至2-3 分钟。④ 进行下游实验时，可用试剂C 分别稀释水相与有机相，取一个水相样品同时进行实验分析。⑤ 用 BCA 法进行蛋白定量。蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
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